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導讀

我國因濫用抗生素、激素和違禁藥品飼喂畜禽，食品安全事件頻發，引起了政府和廣大消費者的高度關注。新型、綠色、無公害生物飼料可以有效解決飼料安全帶來的肉食品安全問題，已經成為行業專家的研究熱點。

生物飼料的一個重要研究方向是微生物固態發酵飼料。當前各種發酵型雜粕等蛋白飼料原料在生豬養殖上的應用試驗研究較多，而微生物發酵全價飼料，特別是微生物發酵無抗生素的全價飼料在生豬生長全階段（20～120kg）飼喂使用的報道則較少見，因此，本試驗在４個不同處理的復合益生菌發酵不含抗生素全價飼料對仔豬進行飼養試驗基礎上，挑選對照組和最佳劑量發酵飼料添加組（20%），進一步研究復合益生菌發酵無抗飼料與含抗生素日糧對比對生長肥育豬（20～110kg）全階段生產性能、血液生化指標、免疫性能以及肉品質的影響，旨在為研發綠色安全環保型無抗發酵飼料并規模化應用提供理論和技術支持。

1材料和方法

1.1復合益生菌制劑和無抗發酵全價配合飼料

本試驗中的復合微生態益生菌制劑由湖南省微生物研究院動物微生物研究室提供，活菌數為≥2×109 cfu／mL。復合益生菌制劑主要成分為枯草芽胞桿菌、乳酸桿菌和釀酒酵母菌等。發酵的底物為生長育肥豬全價配合粉料，發酵時發酵液接種比例5％，添加水分質量比35％，飼料和液體質量比為6∶4。發酵飼料發酵3ｄ以上可以使用，保質期在密封條件下為1個月左右。發酵時間少于3ｄ飼料發酵程度不夠，發酵時間過長容易造成飼料中營養物質的消耗，一般在保質期1個月內使用完畢效果最佳。

1.2試驗動物和分組

將60頭18ｋｇ左右的杜洛克×長白×大白雜交保育仔豬按照體質量大小和公母大致各半的原則完全隨機分作２個處理，每處理設３個重復，每重復的單欄內放入10頭仔豬。以豬場使用的常規含抗生素日糧為基礎對照日糧，作為對照組Ａ；以質量百分比80％不含抗生素的基礎對照日糧和２０％的無抗發酵全價飼料組成試驗組日糧，設定為試驗組Ｂ。２個處理組分別飼喂相對應日糧。試驗于2013年在湖南永州某公司豬場進行。

１.３試驗基礎日糧

為了試驗操作簡便，兼顧生長豬和育肥豬兩階段的營養需要，整個試驗期使用相同日糧配方，其配方組成及營養指標見表１。

其中對照組預混料為每千克全價料提供Cu40ｍｇ；Fe100ｍｇ；Zn 80mg；Mn 40ｍｇ；I１mg；Se0.3ｍｇ；VA9000IU；VD31200IU；VE80IU；VK4ｍｇ；VB36mg；VB320mg；煙酸20mg；泛酸15mg；生物素0.3mg；膽堿300mg；含抗生素黃霉素10mg。試驗組預混料在對照組預混料基礎上去除抗生素，其余完全一致。

無抗飼料發酵前和發酵7ｄ后成分檢測結果：發酵前飼料營養成分檢測值為粗蛋白16.6％，鈣0.58％，總磷0.49％，無機磷0.30％；發酵7ｄ后飼料營養成分檢測值為粗蛋白16.7％，鈣0.58％，總磷0.50％，無機磷0.36％，乳酸菌3.0×109 cfu／ｇ，枯草芽孢桿菌4.8×109 cfu／ｇ，酵母菌5.0×107cfu／ｇ。發酵前飼料中賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸檢測值分別為0.811％、0.264％、0.632％、0.798％；發酵７ｄ后飼料中賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸檢測值分別為0.836％、0.271％、0.629％、0.195％。

1.4飼養管理

按豬場常規飼養管理程序進行。預試期3d，正試期后各組分別使用相應日糧飼喂。自由飲水采食，免疫按豬場正常程序。試驗期154ｄ。

1.5測定指標

１）生產性能指標測定。①平均日增重：對各欄試驗豬于試驗開始當天和試驗結束最后一天早上08：00空腹稱質量，根據初質量和末質量以及試驗天數計算平均日增重。②平均采食量：記錄各組每周的采食量（試驗組按照飼喂基礎量的0.92倍系數換算成與對照組同樣的風干型日糧質量），試驗結束后結算各組消耗飼料，計算出平均日采食量。③料重比：根據日增重和采食量計算。

２）血液生化和免疫指標測定。試驗結束當天早晨從各組隨機抽出3頭接近中等體質量空腹肉豬，經耳靜脈采血各5mL，全血置于采血管中15～30°角度斜面靜置自然析出血清，3000ｒ／min離心15min，用無菌注射器取上部透明血清于離心管中，記號筆標寫清楚。將各血清樣品分成3～4份到1ｍＬ塑料離心管并放入移動式低溫保藏箱，迅速送到市人民醫院檢測，采用日立7020全自動生化分析儀測定以下指標：血清堿性磷酸酶、血清谷草轉氨酶、血清尿素氮、血清葡萄糖、血清總蛋白，血清白蛋白、血清球蛋白。血清免疫球蛋白（IgA、IgG 和IgM）采用免疫透射比濁法測定。

３）肉質指標測定。每個處理組選取３頭接近平均體質量的豬屠宰，宰后0.5～2.0ｈ內，取胸腰椎結合處至第2腰椎處背最長肌進行pH、肉色的測定；取第2～5腰椎處背最長肌（冰箱中保存）用于滴水損失、嫩度和肌內脂肪測定。

分別在屠宰后的45min和2ｈ測定肌肉pH，將肉食品專用pH 計（德國德圖儀器公司Testo－205）探針插入取樣豬肉表面向內約2.5cm深處，讀取數據。

肉色測定采用CIELAB系統，用SC－8C型全自動色差計（北京康光儀器有限公司，北京），屠宰后立即測定采樣豬肉的L* 值、a* 值和b*  值。L* 、a*  和b*  分別表示亮度、紅度和黃度，值越大表示對應的顏色越深。

肌肉嫩度測定：將屠宰后取樣豬肉用塑料袋密封，肉樣中間插入溫度計，在80 ℃ 水中煮約10min，等溫度計顯示溫度達到75℃，取出樣品，查明肌纖維走向，沿肌纖維走向修剪成截面1.27cm×1.27cm左右的肉條。上機測定時，肌纖維走向與刀口垂直。采用C-LM3型數字嫩度計測定肌肉嫩度（東北農業大學，哈爾濱），測試刀頭行走速度200ｍｍ／min，記錄單位為牛，N。

背最長肌的肌內脂肪測定采用有機溶劑正己烷進行索氏脂肪抽提，以脂肪含量占肌肉組織鮮質量的百分比表示測定結果。

1.6數據處理

數據采用SAS軟件進行ｔ檢驗統計分析，以P＜0.05作為數據結果差異是否顯著的判斷標準，結果用平均值±標準差表示。

2結果與分析

2.1無抗發酵飼料對生長育肥豬生產性能的影響

在試驗期內，對照飼喂含有抗生素的基礎日糧，試驗組飼喂含20％無抗發酵飼料的日糧，2個處理組對生長育肥豬生產性能的影響見表2。

從表2可知：20％無抗發酵飼料添加試驗處理組的結束平均頭質量、平均日增重和平均日采食量都顯著高于對照組，而試驗組的耗料增重比則顯著低于對照組。與對照組比較，試驗組平均日增重提高10.89％，平均日采食量提高5.86％，耗料增重比降低4.38％。

2.2無抗發酵飼料對生長肥育豬血液生化指標和免疫指標的影響

無抗發酵飼料對生長肥育豬血液生化指標和免疫指標的影響見表3。

由表3可見：試驗組（無抗飼料添加組）的血清谷草轉氨酶、尿素、白蛋白和白球比例都顯著低于對照組；而試驗組的血清堿性磷酸酶、葡萄糖、球蛋白和IgG則顯著高于對照組。2個處理組間血清總蛋白、IgM 和IgA檢測數值差異不顯著。

2.3無抗發酵飼料對生長肥育豬肉品質的影響

無抗發酵飼料對生長肥育豬肉品質的影響見表4。由表4可見，2個處理組之間屠宰豬肉的亮度值（L*）和黃度值（b* ）差異不顯著。試驗處理組屠宰豬肉的45minpH、2hpH、紅度值（a*）和肌內脂肪顯著高于對照組，與對照組比較分別提高3.09％、2.11％、8.06％和28.06％；試驗處理組屠宰豬肉的滴水損失和剪切力顯著低于對照組，與對照組比較分別降低36.24％和29.41％。

3討  論

3.1無抗發酵飼料對生長育肥豬生產性能的影響

本試驗中發酵無抗飼料采用的復合微生態制劑是由乳酸菌、枯草芽胞桿菌和釀酒酵母菌按照1∶1∶1比例組成的。生產的發酵飼料中除了含有活的益生菌，還有其代謝過程產生的淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶等消化酶。飼料的發酵過程可以將飼料蛋白部分分解為小肽和游離氨基酸，可以賦予發酵飼料酸香味，改善適口性，促進采食，提高飼料的消化率和增加動物對飼料的消化能力，提高動物的生長性能。在本試驗中，試驗組添加20％無抗發酵飼料明顯比對照組的平均日增重、平均日采食量、耗料增重比都要好。這個結果與前人的研究報道基本一致。比如劉瑞麗等研究發現飼料經復合益生菌（主要成分為：芽胞桿菌、乳酸桿菌、酵母菌等）發酵后，品質得到改善，其最佳發酵時間為6ｄ，具有改善肥育豬生產性能的效果，與本試驗研究結果一致。眾多研究者發現發酵飼料在生長肥育豬上使用都可以取得較好的經濟效益。張云影等通過在育肥豬日糧中添加20％袋裝厭氧固態發酵飼料，發現對降低藥費開支、提高豬群采食量、提高育肥豬日增重均有良好效果，試驗組平均盈余比對照組多出31.36元／頭。發酵飼料在肥育豬飼糧中等量代替5％的豆粕，能顯著提高肥育豬增重，降低料重比，飼料成本下降，經濟效益提高。黃印堯等應用酒糟益生菌發酵飼料喂豬，結果表明每頭出欄肥豬可以降低飼料成本達60元。曹啟民等在基礎飼料中添加20％的自制靈芝菌糠發酵飼料對豬的生長性能未產生顯著影響，但是可降低每千克增重飼料成本約5.19％。肖軻等飼喂低劑量發酵飼料組（添加量為7.5％，菌種組合為乳酸菌、釀酒酵母和芽孢菌）平均日增重高于對照組和高劑量發酵飼料添加組（添加量為15％），而高劑量發酵飼料添加組優于對照組。在發酵飼料的添加劑量上大家的研究結果不盡相同，可能和各個試驗具體使用的益生菌菌群組合、發酵飼料中是否添加抗生素、全價料的配方組成以及試驗豬只品種等因素的差異性有關。

3.2無抗發酵飼料對生豬育肥豬血液生化指標和免疫功能指標的影響

機體新陳代謝產生的變化可以通過血液生化指標的變化表現出來。血清谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶是肝臟和心臟器官功能反映的重要指標，如果其指標水平過高，說明相應的器官可能受到一定損傷。

血清堿性磷酸酶活性和機體生長緊密相關，堿性磷酸酶水平的升高就表示成骨細胞活性提高，骨質生成旺盛，骨中鈣、磷的沉積增加。唐曉玲等認為血清中堿性磷酸酶檢測水平的高低與動物的生長速度密切相關。本試驗中20％無抗發酵飼料添加組肉豬的堿性磷酸酶活性顯著高于含抗生素日糧的對照組，進一步確證了益生菌發酵飼料能夠提高肉豬生長性能。

動物體內的蛋白質代謝和氨基酸之間的平衡狀況可以通過血清尿素氮含量準確反映出來，氨基酸平衡較好時則血清尿素氮含量下降。血清尿素氮含量容易受到飼料中蛋白質、氨基酸含量與質量等因素的影響，其濃度與體內氮沉積率、蛋白質或氨基酸利用率呈顯著負相關關系。

本試驗數據結果表明，無抗發酵飼料組的血清尿素氮含量明顯低于對照組，表明益生菌發酵飼料可提高動物機體氮沉積，增加蛋白質合成，提高生長速度。2種飼料血清尿素氮差異可能與飼料中氨基酸組成和平衡有關。本試驗中通過益生菌發酵后飼料中賴氨酸含量有明顯增加，其他氨基酸檢測數值變化不大。本試驗無抗發酵飼料對生長育肥豬血液各項指標結果與以前研究結果基本一致。血清中總蛋白濃度反映了機體對蛋白的吸收情況和體液免疫的關系。白蛋白對肝臟在蛋白代謝中起著重要作用。血清球蛋白是機體免疫器官制造的，對機體免疫力具有重要作用，免疫水平的高低間接反映了機體對疾病的抵抗能力。本試驗結果顯示無抗發酵飼料與有抗生素的對照組比較，對育肥豬的血清中總蛋白、IgM 和IgA無差異顯著性影響，但是顯著提高血清中球蛋白和IgG水平；表明生長育肥豬日糧中添加微生物發酵飼料有助于提高其機體的免疫能力，與眾多研究結果基本一致。但是肖軻等飼喂肥豬低劑量發酵飼料組（添加量為7.5％，菌種組合為乳酸菌、釀酒酵母和芽胞菌）血清中白蛋白含量、尿素氮含量均高于對照組和高劑量發酵飼料添加組（添加量為15％），部分血液生化指標變化規律與本試驗不一致。

益生菌發酵飼料能夠提高動物的免疫力，其作用機理可能有以下五方面原因：

（１）腸道中的優勢益生菌群可以促進機體免疫器官發育和成熟，提高Ｔ、Ｂ淋巴細胞的數量，啟動免疫應答；

（２）有益菌在腸道粘膜定植能激活腸道粘膜的免疫功能，誘導淋巴組織漿細胞生成分泌型免疫球蛋白（sIgA），提高免疫功能；

（３）益生菌可以激活腸黏膜上的巨噬細胞、T淋巴細胞和自然殺傷（NK）細胞，調節細胞因子（白細胞介素、干擾素（IN）－γ等）產生量來調控T、B淋巴細胞分化方向；

（４）益生菌（地衣和枯草芽胞桿菌等）經由直接或間接途徑發揮其免疫佐劑樣作用，增強接種疫苗抗體水平；

（５）益生菌能代謝合成細菌素類物質，激活機體免疫系統。

３.３無抗發酵飼料對生長肥育豬肉品質的影響

本試驗中，無抗發酵飼料添加可以有效改善育肥豬的肉品質，提高了屠宰后pH值、肉色紅度值、肌肉嫩度、肌內脂肪含量，降低了滴水損失，試驗結果和前人研究基本一致。肌內脂肪是肉質的一項重要評定指標，隨著肌內脂肪含量的增高，肌束易于分離和咀嚼，肉的嫩度和風味得以改善。發酵飼料能夠減少肌肉剪切力，提高肉質嫩度，可能和發酵飼料可以增加肌內脂肪有關。沈彥鋒等試驗主要研究生物發酵飼料對魯萊黑豬肥育豬生長及肉質特性的影響發現試驗組豬肉保水能力、瘦肉率、pH顯著高于對照組，但是試驗組肌內脂肪數值上低于對照組，與本試驗不一致。發酵飼料能夠改善肉品質可能與發酵改變了飼料中的呈味氨基酸和小肽組成密切相關。張云影等通過在育肥豬日糧中添加20％袋裝厭氧固態發酵飼料，發現可以降低藥費開支，尤其是發酵飼料添加試驗組育肥豬不使用任何藥物，徹底解決了藥物殘留問題。

綜合本試驗結果可見，在生長育肥全階段合理添加使用益生菌發酵無抗飼料能提高其生產性能，增強免疫能力，提高屠宰豬肉肉品質。可以實現無抗健康生豬養殖，生產安全優質無抗豬肉，可以滿足市場對豬肉安全和優質的雙重需求，產生巨大的社會效益和經濟效益。