4 樣品采集及測定方法

4.1 產奶量測定

試驗期每天測定２次，分別于4：30和17：30收集牛乳，采用美國BouMatic自動擠奶系統記錄產奶量。

4.2 牛奶成分分析

于試驗期第１０、２０、３０和４０天早晚按１∶１比例采集５０ｍＬ奶樣盛入加有重鉻酸鉀的離心管中混合均勻，送往洛陽市ＤＨＩ檢測中心，采用美國本特利ＬＹ－ＹＱ０００２測定儀進行體細胞測定，ＦＣＭ－１５０分析儀測定乳脂肪、乳蛋白、乳糖、非固體物質、干物質、尿素氮等指標。

4.3 乳清指標的測定

乳清指標均用上海翱藝UV－1200型紫外可見分光光度計測定。于試驗期第10、20、30和40天早晚按１∶１比例每頭牛各采集50ｍＬ乳樣，經４℃低溫離心（1000r／min，30min）取中間層，將所得乳清分裝在１０個離心管，－２０℃冷凍保存待測。乳清測定指標包括：超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、總抗氧化能力（ＴＡＣ）、丙二醛（ＭＤＡ）、蛋白定量、堿性磷酸酶（ＡＫＰ）、谷丙轉氨酶（ＡＬＴ）及谷草轉氨酶（ＡＳＴ）。

5 數據處理

數據采用Excel進行初步整理，用 SPSS 20.0 進行單因素方差分析（one－wayANOV），采用 Duncan 法進行多重比較，數據以“平均值±標準差”表示。

結果與分析

1 雜交構樹發酵飼料營養成分

雜交構樹發酵飼料成熟后，莖葉清晰可見，氣味芳香，質地柔軟。由表2可見，相對于苜蓿草粉而言，雜交構樹發酵飼料的CP、TND和NEL相當，NDF、EE、Ash與Ca的含量較高，而ADF、ADL、P含量略低。從主要營養成分指標看，雜交構樹發酵飼料替代苜蓿飼喂奶牛是可行的。

2 奶牛產奶量和乳成分

奶牛產奶量和乳成分見表3。與對照組相比：試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組產奶量、乳脂率、乳蛋白率和干物質差異不顯著（P＞0.05）；試驗Ⅰ組乳糖率顯著提高（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05），但Ⅰ組較Ⅱ組提高了1.39％（P＜0.05）；試驗Ⅱ組非脂固體顯著降低（P＜0.05），Ⅰ、Ⅲ組無差異顯著（P＞0.05）；Ⅰ組尿素氮顯著降低（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ組有降低趨勢但差異不顯著（P＞0.05）；試驗Ⅲ組體細胞降低了36.11％（P＜0.05），Ⅰ、Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05）。

3 奶牛乳清指標

3.1 奶牛乳清抗氧化指標

由表4可見，與對照組相比，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組ＳＯＤ均差異不顯著（P＞0.05）；Ⅰ、Ⅱ組ＭＤＡ含量差異均不顯著（P＞0.05），試驗Ⅲ組的含量顯著降低（P＜0.05）；Ⅰ、Ⅱ組ＴＡＣ均無顯著差異（P＞0.05），試驗Ⅲ組顯著提高了47.83％（P＜0.05）。

3.2 奶牛乳清生化指標

由表5見，與對照組相比，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組蛋白定量及ＡＫＰ均差異不顯著（P＞0.05）；Ⅱ、Ⅲ組ＡＬＴ顯著降低（P＜0.05），Ⅰ組差異不顯著（P＞0.05）；Ⅰ組ＡＳＴ顯著降低71％（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ組差異均不顯著（P＞0.05）。

討論

1 雜交構樹發酵飼料對產奶量及乳成分的影響

產奶量是衡量奶牛生產性能的直觀標準，飼喂雜交構樹發酵飼料對奶牛產奶量及乳成分含量均有一定程度的積極影響，但奶量、乳脂率、乳蛋白和干物質各組間差異均不顯著，這與Si等的研究結果基本一致。非脂乳固體含量是衡量牛乳營養質量的一項指標，會影響酸奶的粘稠度及保鮮度，本試驗中8％添加量的試驗結果與張慧敏等的非脂固體與乳糖、乳蛋白呈顯著正相關研究結果略有差異，但符合不得低于8.3％的標準。

乳糖是乳中主要的碳水化合物，可以促進鈣和氨基酸的吸收、調節腸道菌群。在斷奶前和剛斷奶的仔豬飼料中加入高濃度的乳糖可避免引發道的高滲透壓，降低腹瀉率。利用牛奶尿素氮含量評價奶牛日糧粗蛋白水平、能氮平衡、氮利用率、繁殖率以及診斷代謝疾病已成為奶牛科學研究的熱點。有研究表明尿素氮值隨產奶量的增加而升高，Broderick等研究發現尿素氮值和產奶量呈負相關，并與乳蛋白、乳脂含量均呈負相關。此外，牛奶中的體細胞是反映乳腺健康和牛奶品質的關鍵因素，因為這些細胞是在乳腺炎免疫反應時產生的，每毫升含有40多萬體細胞的牛奶被認為不適合人類食用，到達50萬則被認為是隱性乳腺炎。相關研究表明，如果將體細胞水平降低到50000個／mL，不僅能夠提高牛奶產量，農場溫室氣體總排放強度也有可能降低3.7％。在本試驗中，添加12％的雜交構樹發酵飼料對降低牛奶體細胞效果明顯，這與Si等研究結果相一致。此外，有報道體細胞的增加會導致脂肪和蛋白質含量增加，而牛奶產量、乳糖和尿素氮含量將明顯下降，但本試驗未發現此類情況，可能是由于雜交構樹中的活性成分具有抗炎作用，從而避免了因炎癥所導致的相關指標合成減少。Reis等在乳體細胞的差異水平研究中發現了乳脂、蛋白質和乳糖的相應變化，并且乳體細胞與乳尿素氮值之間呈正相關，Mazal等在研究中也得出了同樣的結論，即當奶牛的乳房沒有被感染時，體細胞和牛奶中的蛋白質含量之間可能沒有聯系。

2 雜交構樹發酵飼料對乳清抗氧化指標的影響

牛乳中含有60種以上的酶，通過分析泌乳過程中進入乳中的酶，可以獲知乳腺細胞的代謝情況，并輔助進行相關疾病的診斷，同時多種抗氧化物質的攝取對于人類預防心血管、癌癥、神經等疾病具有重要意義。ＳＯＤ和ＴＡＣ是衡量生物機體內抗氧化能力的重要指標，可降低自由基對機體的毒害程度；血漿酶活性在產奶期和干奶期有顯著變化，需要在產奶期對相關參數進行持續監測；脂質過氧化被認為是包括炎癥在內的許多疾病的關鍵因素，同時導致牛奶營養價值降低；ＭＤＡ為脂質過氧化標志物，檢測ＭＤＡ的濃度不僅可以判斷脂質過氧化程度，還可作為乳腺炎的診斷指標。抗氧化系統能夠有效地應對過氧化脂質的產生，可在ＭＤＡ中觀察到巨大的個體間變異。

相關報道表明牛奶體細胞計數與ＭＤＡ正相關，與ＴＡＣ負相關，本試驗與此研究結果一致。黃酮類化合物是影響雜交構樹青貯飼料抗氧化活性的主要成分，隨著該成份的增加，雜交構樹青貯飼料的抗氧化能力得到提高。相關研究表明灌木和樹木的平均ＴＡＣ水平高于草及干草，高ＴＡＣ植物的攝入可能有利于牛的ＴＡＣ狀態。本試驗中雜交構樹青貯飼料未對奶牛乳清ＳＯＤ濃度產生影響，試驗結果均在正常范圍之內，這可能是由于試驗周期或雜交構樹青貯飼料的劑量不在適當范圍內所造成的。

3 雜交構樹發酵飼料對乳清生化指標的影響

ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＡＫＰ是重要的分解酶，在動物的肝功能方面有重要作用。牛乳中的ＡＫＰ也來自中性粒細胞，在未感染乳腺炎外周血中，酶活性相對較低。當微生物侵染時，機體啟動免疫防御機制的表現之一是帶有ＡＫＰ活性的中性粒細胞比率增加，且在感染后第3天ＡＫＰ的活性顯著提高，即ＡＫＰ活性與炎癥嚴重程度密切相關。也有研究表明體細胞和ＡＫＰ呈極顯著正相關，但本試驗ＡＫＰ各組間差異不顯著，這可能是由于試驗時間不足或添加劑量不在適當范圍內所造成的。血清轉氨酶水平升高是肝臟疾病的一項指標，Liu等研究發現牛奶和血漿中血清轉氨酶活性之間有顯著正相關性，檢測牛奶中ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＫＰ活性可能是監測奶牛肝功能的一種替代方法。Misle 等研究結果表明，機體內的ＡＬＴ和ＡＳＴ與牛齡正相關，而本試驗所選牛胎次為２～４胎，存在一定的年齡差距，因此對本項指標或有一定影響。乳清可用作功能性食品，乳清蛋白對與氧化應激相關的疾病有治療作用，同時有助于降低血液中轉氨酶、尤其是ＡＬＴ的水平。乳清在體外試驗中具有影響轉氨酶的還原、抑制酶活性等作用。導致奶牛酶活性變化的原因是多方面的，本試驗中檢測到的ＡＳＴ差異可能與試驗個體的生理階段以及環境等因素有關，這些因素還有待進一步研究。

結論

添加8％和12％雜交構樹發酵飼料可降低牛乳體細胞含量，并提高乳清抗氧化功能，雜交構樹發酵飼料可作為新型木本飼料開發利用。