1.1 試驗材料

蛋白酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、α-半乳糖苷酶均來源于挑戰(zhàn)集團，酶活測定分別參照GB/T 28715—2012、GB/T 24401—2009、NY/T911—2004、GB/T 23874—2009、GB/T 36861—2018、Q/HDTZW 0009—2012。

1.2 體外篩選試驗

采用單因素完全隨機設(shè)計，以玉米-豆粕型日糧（75%玉米+25%豆粕）為研究對象，按照500g/t飼料的添加量，設(shè)計每種酶制劑在飼料中的添加水平如表1。

將6種酶制劑按照內(nèi)源酶（蛋白酶和淀粉酶）和非淀粉多糖酶（β-葡聚糖酶、木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、α-半乳糖苷酶）設(shè)計添加量水平。內(nèi)源酶選擇臥式模塊，以豬模擬消化液及流程進行篩選（試驗設(shè)計如表2），每個處理5個重復(fù)，每個重復(fù)1根消化管；非淀粉多糖酶酶譜的篩選采用立式模塊進行飼料還原糖釋放量的測定（試驗設(shè)計如表3），每個處理4個重復(fù)，每個重復(fù)1根消化管。

1.5 檢測指標(biāo)

1.5.1 仿生消化法測定干物質(zhì)消化率和還原糖釋放量

基于仿生消化系統(tǒng)的飼料干物質(zhì)消化率和還原糖釋放量的測定參考《單胃動物仿生消化系統(tǒng)操作手冊》。

1.5.2 生長性能檢測

預(yù)試期為7 d，正式試驗期設(shè)定為28d，分別于正試期開始和結(jié)束時清晨空腹稱重，準(zhǔn)確記錄飼料消耗量，計算出平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

平均日增重(ADG，g)=(試驗?zāi)┢骄w重-初期平均體重)/試驗天數(shù)

平均日采食量(ADFI，g)=試驗期總耗料量/試驗天數(shù)

料重比(F/G)=平均日采食量/日增重

1.5.3 腹瀉率及發(fā)病率

試驗期間仔細(xì)觀察并記錄仔豬腹瀉情況。

腹瀉率(%)=試驗全期腹瀉頭次/ （試驗頭數(shù)×試驗天數(shù)）×100

發(fā)病率(%)=觀察期間內(nèi)發(fā)生的新病例數(shù)/同期平均豬只頭數(shù)×100

1.6 數(shù)據(jù)處理

3.1 復(fù)合酶的體外篩選

我國乳仔豬日糧類型以玉米-豆粕型為主，玉米-豆粕型日糧的主要抗?fàn)I養(yǎng)因子是非淀粉多糖，包括β-葡聚糖、木聚糖、果膠、甘露聚糖等。酶制劑作為一種功能復(fù)雜的生物活性物質(zhì)，雖然不直接提供營養(yǎng)，但與飼料中營養(yǎng)成分的利用率息息相關(guān)。飼料原料在酶制劑作用后的營養(yǎng)價值如何快速準(zhǔn)確有效的評定一直是行業(yè)內(nèi)關(guān)心的問題。用體外消化法模擬動物腸道消化吸收的生理作用，在體外通過測定加酶前后營養(yǎng)物質(zhì)消化率的變化，可對酶制劑的作用效果進行評估。Simbaya等的研究表明，采用透析技術(shù)進行體外酶解，評價和比較了8種碳水化合物酶和13種蛋白酶對碳水化合物和蛋白質(zhì)體外酶解的效果，研究結(jié)果與體內(nèi)結(jié)果一致性較好。廖睿等的研究表明，當(dāng)仿生系統(tǒng)的上樣量在0.2~0.8 g范圍內(nèi)，還原糖釋放量與上樣量之間呈顯著相關(guān)，仿生消化法測定豬飼料原料還原糖釋放量的重復(fù)性和可加性可滿足定量分析要求。高慶濤等的研究結(jié)果顯示，通過仿生消化法，檢測不同實驗室間玉米和豆粕原料酶水解物能值的總變異系數(shù)，結(jié)果表明該變異系數(shù)可控在1.64%以內(nèi)，再現(xiàn)性符合定量分析要求。本研究的結(jié)果表明，當(dāng)內(nèi)源酶譜不同時，體外干物質(zhì)消化率差異明顯，值得注意的是，淀粉酶的添加量越大，干物質(zhì)消化率越高，這是因為日糧中淀粉含量高。幼齡動物消化系統(tǒng)發(fā)育尚不成熟，淀粉酶分泌不足，添加淀粉酶有利于飼料原料的轉(zhuǎn)變成可消化的小分子化合物。當(dāng)非淀粉多糖酶組成及添加水平不同時，還原糖釋放量也有所不同。馮定遠提出組合酶和組合型復(fù)合酶的概念，為復(fù)合酶制劑的開發(fā)提供了理論依據(jù)。復(fù)合酶的酶譜組成與日糧中的非淀粉多糖成分和含量有關(guān)。酶制劑的使用效果與飼糧含抗?fàn)I養(yǎng)因子的種類和比例以及動物的種類和生長階段有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，不同非淀粉多糖酶酶譜組成對還原糖釋放量有明顯影響，其中α-半乳糖苷酶效果最好，這可能與豆粕中半乳糖含量相對較高有關(guān)。綜合內(nèi)源酶與外源酶的作用效果，當(dāng)酶譜為蛋白酶10000U/g、淀粉酶500U/g、β-葡聚糖酶300U/g、木聚糖酶15000U/g、β-甘露聚糖酶2000U/g、α-半乳糖苷酶150U/g時，酶制劑的效果最優(yōu)。因此，酶制劑的酶譜組成中單酶含量并不是越多越好，添加量應(yīng)在一個適合范圍內(nèi)，合理的酶制劑的添加水平非常重要。這一點與廖睿的研究結(jié)果一致。

3.2 乳豬復(fù)合酶對斷奶仔豬生產(chǎn)性能、腹瀉率和發(fā)病率的影響

在仔豬日糧中添加復(fù)合酶，可以補充內(nèi)源酶不足，激活內(nèi)源酶分泌，提高仔豬對淀粉、蛋白質(zhì)及非淀粉多糖的消化利用，提高腸道健康狀態(tài)。高玉紅等在斷奶仔豬日糧中添加由酸性蛋白酶、糖化酶、淀粉酶、纖維素酶以及果膠酶等組成的復(fù)合酶，仔豬日增重高于對照組，料重比也有較大程度地改善(P>0.05)，隨著酶量的增加，料重比比對照組分別降低8.33％、15.42％和17.08％。而李國旺等的研究表明，在基礎(chǔ)日糧中添加0.05%、0.1%和0.15%的乳豬復(fù)合酶，平均日增重分別比對照組提高5.5%、10.7%、10.9%，腹瀉率分別下降24%、28%、28%。本研究結(jié)果表明，經(jīng)單胃動物仿生消化系統(tǒng)篩選的乳豬復(fù)合酶在體內(nèi)作用效果較好。與不加酶組相比，添加乳豬復(fù)合酶對于日增重有增加趨勢，但差異不顯著(P>0.05)，對日均采食量無明顯差異(P>0.05)，這可能是因為非淀粉多糖酶將日糧中的抗?fàn)I養(yǎng)因子降解后提高飼料中能量和蛋白質(zhì)的營養(yǎng)利用率。每噸飼料添加量為500 g時，與對照組相比料肉比無顯著變化(P<0.05)；每噸添加量為1 000 g時，料肉比顯著降低了3.65%，差異顯著(P<0.05)，說明添加量的適當(dāng)增加有利于料肉比的減小。該仔豬專用復(fù)合酶對斷奶仔豬腹瀉率和發(fā)病率具有明顯效果，與不加酶組相比，每噸飼料添加500 g和1000 g復(fù)合酶，仔豬的腹瀉率分別顯著降低了 37.57%(P<0.05)和 87.03%(P<0.05)；相對于對照組，添加500 g乳豬酶組的發(fā)病率沒有顯著變化，而添加1 000 g組的發(fā)病率顯著降低了79.17%(P<0.05)。仔豬專用復(fù)合酶對于提高仔豬抗病能力具有較好的作用效果，但是在合理范圍內(nèi)較大量添加可更好改善乳仔豬的腸道微生態(tài)健康，減少腹瀉和疾病的發(fā)生，該結(jié)果趨勢與李國旺等的結(jié)果一致。