Q1

布病陽性養(yǎng)殖場在抗體檢測結(jié)果全部轉(zhuǎn)陰后，多長時間可從外面引進(jìn)牛羊？

牧場里引進(jìn)新的牛羊之后，不要立即混群。引進(jìn)之前先做一次布病檢測，檢測結(jié)果為陰性后最好再隔離飼養(yǎng)7-15天，復(fù)檢結(jié)果為陰性后再混群飼養(yǎng)。

Q2

豬布魯氏菌病嚴(yán)重嗎？

豬的布病目前在我國不嚴(yán)重，根據(jù)農(nóng)科院牧醫(yī)所布病實驗室監(jiān)測和確診情況分析，可以說我國目前還沒有確診到豬的布病。

Q3

布病血清檢測一般做滅活處理嗎？如何滅活？

一般ELISA檢測不做滅活處理，補(bǔ)體結(jié)合試驗推薦滅活。滅活操作：將待檢血清以56℃，30 min 的條件做滅活處理。

Q4

布魯氏菌競爭ELISA抗體檢測試劑盒可以在動物感染多久后查出可疑或全陽性？

競爭法為初篩方法，能更早的檢測出布病陽性抗體。我們開發(fā)的cELISA應(yīng)該是一周之內(nèi)可以檢測到（但是需要調(diào)整Cut-off值）。間接ELISA應(yīng)該更晚。

Q5

試劑盒能區(qū)分野毒和疫苗抗體嗎？

實際上，抗體本身沒有區(qū)別，我們可以根據(jù)不同亞型抗體水平產(chǎn)生的高低，結(jié)合群體的免疫情況做出初步的判定。要對個體動物進(jìn)行判定的話也不是完全不可以，比較復(fù)雜，要綜合運用多種方法。比如需要將IgM和IgG分別單獨檢測，必要時得選用2個不同的時間點，將IgM曲線和IgG曲線繪制出來后用2種方法進(jìn)行檢測，由于野毒株和疫苗株它的抗體是有交集的，如果落在交集點上我們是沒法區(qū)分的，這個時候需要我們通過時間間隔實施區(qū)分。

Q6

強(qiáng)制免疫后的群體如何進(jìn)行鑒別檢測？

目前用到競爭ELISA方法，蘭研生物的競爭ELISA抗體檢測試劑盒就可以。當(dāng)然需要評估和對Cut-off值調(diào)整后使用。

Q7

目前羊場用布病活疫苗進(jìn)行免疫防疫，保護(hù)效果怎么樣？有無副作用？

S2和A19對羊的免疫效果都還是可以的，A19被認(rèn)為對山羊有一定的副作用。S2和A19都不可以注射免疫懷孕羊。

Q8

PCR檢測結(jié)果參考意義是什么？

PCR檢測主要用于對風(fēng)險的分析，不作為確診的標(biāo)準(zhǔn)，在一定的程度上可作為診斷的輔助方法。

Q9

一般感染布魯氏菌多久后可以進(jìn)行抗體檢測？

一周時間即可進(jìn)行抗體檢測。

Q10

未來有沒有試劑盒可以區(qū)分野毒和疫苗毒？

有。這個得根據(jù)疫苗來定，現(xiàn)在也可以做到，但非常繁瑣，只局限于像我們的專業(yè)性實驗室，目前無推廣價值。我們期待新型疫苗能輕松改變這樣的現(xiàn)狀。

Q11

虎紅平板及試管凝集較cELISA方法有哪些優(yōu)勢與不足？在實際應(yīng)用中，是否應(yīng)綜合采用多種檢測方法對來提高檢測的準(zhǔn)確性？

虎紅平板及試管凝集的優(yōu)勢是操作簡單，不足是準(zhǔn)確率不高。實際上現(xiàn)在使用的cELISA方法也很簡單，且準(zhǔn)確率很高。在實際應(yīng)用中我們需要綜合多種檢測方法檢測來提高準(zhǔn)確率。

Q12

在實驗室或者臨床采樣過程中，怎么做好個人防護(hù)呢？

這很重要，當(dāng)我們確定布病陽性牧場的時候，我們要務(wù)必做好呼吸道及眼鼻的防護(hù)。

Q13

牛羊布病一年免疫幾次較好？以后是否逐漸檢測凈化？

一年最多免疫一次，以后我們會逐漸檢測凈化。

Q14

基層獸醫(yī)如何開展檢測？網(wǎng)上購買的檢測試劑可靠嗎？

基層獸醫(yī)也可以用ELISA的方法來進(jìn)行檢測，虎紅平板也可以。不管是網(wǎng)上還是線下采購的試劑盒，最好都應(yīng)該做一下可靠性評估。

Q15

虎紅檢測結(jié)果大量呈陽性，競爭ELISA檢測結(jié)果全是陰性，這種結(jié)果如何確診？

有可能試劑盒存在很大的問題。理論上競爭ELISA應(yīng)該比虎紅檢測出更多的陽性，因為虎紅雖然是初篩方法，但是更接近確診?；⒓t通過低PH值抑制了大部分IgM活性，本質(zhì)上更接近確診的方法。當(dāng)然也不能排除虎紅的質(zhì)量問題，有些虎紅質(zhì)量不好，存在自凝現(xiàn)象，也有些虎紅，敏感性設(shè)的太高，導(dǎo)致大量非特異性，即假陽性。

Q16

對于同一公司不同批次的試劑盒檢測同一份樣品結(jié)果的差異較大，應(yīng)如何處置？

主要原因還是產(chǎn)品批次不穩(wěn)定，質(zhì)控沒有設(shè)好。最好的處置方法就是不用這樣的試劑盒。

Q17

什么情況下適合采用熒光偏振方法來檢測布病？

熒光偏振實際上是一種確診方法，而不是初篩的方法。熒光偏振試劑中，標(biāo)記抗原雖然同時結(jié)合了血清中特異性IgM和IgG，但是由于IgM的對稱性結(jié)構(gòu)，實際獲取的僅僅是IgG引起的偏振數(shù)據(jù)。

Q18

一般布病免疫后幾個月開始檢測?

兩周到兩個月。cELISA方法應(yīng)該在兩周到六周的時間。前提是試劑盒需求提前評估，且Cut-off值需要做調(diào)整。

Q19

陽性血清中有活菌嗎？

一般沒有。菌血癥情況下可能會有。

Q20

布病疫苗一年打幾次？

一年一次。

Q21

抗原檢測可靠嗎？

病原分離鑒定是抗原檢測的方法之一，是可靠的。如果是核酸檢測，就只能作為輔助診斷的方法。

Q22

抗體檢測時發(fā)現(xiàn)復(fù)孔之間重復(fù)性差的原因有哪些？如何有效避免?

主要有兩點。一是試劑盒不穩(wěn)定；二是操作人員操作問題，比如第一次和第二次加樣量差異。

Q23

注射疫苗后導(dǎo)致排菌的原因？

因疫苗免疫的刺激，導(dǎo)致已經(jīng)存在布病感染的動物出現(xiàn)排菌增加的現(xiàn)象。

Q24

ELISA實驗室污染嚴(yán)重怎么解決?

ELISA實驗室一般不會出現(xiàn)污染嚴(yán)重的情況，但在實驗操作中應(yīng)盡可能做到避免污染，污染將導(dǎo)致在下游數(shù)據(jù)分析中出現(xiàn)很多問題，如孔與孔之間的高差異高背景值等，有幾種方法可以防止污染：首先確保在一個干凈的環(huán)境中進(jìn)行操作，檢測用水為去離子水或蒸餾水，加樣時不同樣品之間及時更換槍頭，前期處理樣本或加樣時應(yīng)小心謹(jǐn)慎，避免濺到或造成交叉污染；確保各試劑供應(yīng)經(jīng)常更新，每次加試劑時只取需要的量即可，避免將剩余試劑倒回原試劑瓶，因為這可能引入污染物。

Q25

免疫牛羊的產(chǎn)品是否會對人體產(chǎn)生危害？

一般不會對人體造成危害。只有布魯氏菌才能感染人進(jìn)而造成危害，而免疫過布病疫苗的動物血清和動物產(chǎn)品中只含布魯氏菌抗體，并沒有布魯氏菌，因此免疫牛羊的產(chǎn)品對人體無害。

Q26

cELISA檢測出具的陽性報告，是否可以作為捕殺的依據(jù)？

cELISA是初篩的方法，不能作為撲殺依據(jù)。試管凝集實驗為陽性時即可作為撲殺依據(jù)。